I. Cos'è una fiasca per colture cellulari?
Una fiasca per colture cellulari è un comune strumento di laboratorio utilizzato per la coltura cellulare. È realizzata in polistirene (PS) di alta qualità, prodotta utilizzando stampi di ultra-precisione e processi di produzione completamente automatizzati. Il prodotto è utilizzato per la coltura cellulare in laboratorio; le sue eccellenti proprietà ottiche facilitano l'osservazione al microscopio e la superficie è trattata con TC per una migliore adesione cellulare.
II. Inoculazione della sospensione cellulare nella fiasca per colture cellulari
1. Miscelazione della sospensione cellulare: Preparare la sospensione cellulare secondo la concentrazione sperimentale richiesta e miscelarla accuratamente in una fiasca per colture cellulari, un recipiente per colture cellulari o altro contenitore.
2. Utilizzando una pipetta o una pipetta Pasteur, iniettare lentamente e con cautela la sospensione cellulare nella fiasca di coltura, evitando schizzi o formazione di schiuma. (Nel caso di fiasche di coltura multistrato, è necessario prestare particolare attenzione alla distribuzione uniforme del liquido; inclinare o ruotare la fiasca può contribuire a garantire un flusso uniforme del liquido in ogni strato).
3. Posizionare delicatamente la fiasca di coltura su una superficie di lavoro stabile, assicurandosi che il lato liscio e piatto sia rivolto verso l'alto e il lato con gradiente verso il basso (design impilabile per una facile manipolazione).
4. Collocare la fiasca di coltura in un incubatore adatto e impostare la temperatura appropriata (ad esempio, 37 °C), l'umidità e la concentrazione di gas (ad esempio, 5% di CO₂).
5. Lasciare crescere le cellule nella fiasca di coltura per un determinato periodo di tempo.
III. Cambio del terreno di coltura
1. Rimozione del vecchio terreno di coltura: durante l'aspirazione del terreno di coltura, inclinare la fiasca di 45 gradi con il lato liscio rivolto verso di sé. Aspirare delicatamente il vecchio terreno di coltura utilizzando una pipetta Pasteur o una pipetta, facendo attenzione a non staccare le cellule aderenti. Se sono presenti molte cellule in sospensione o impurità nel terreno di coltura, lavare le cellule una o due volte con tampone PBS per rimuovere tali impurità.
2. Aggiunta di nuovo terreno di coltura: dopo aver rimosso il vecchio terreno di coltura, aggiungere una quantità appropriata di nuovo terreno di coltura alla fiasca. Aggiungere il terreno dalla parete laterale della fiasca per evitare di colpire direttamente le cellule aderenti. Allo stesso tempo, la quantità di nuovo terreno di coltura da aggiungere deve essere determinata in base alla densità cellulare e al tasso di crescita per garantire una crescita cellulare normale.
IV. Raccolta delle cellule
1. Rimozione del vecchio terreno di coltura: Aspirare delicatamente il vecchio terreno di coltura dalla fiasca di coltura cellulare, aggiungere una quantità appropriata di tampone PBS e agitare delicatamente per lavare via eventuali residui di terreno di coltura, assicurandosi che la superficie cellulare sia pulita.
2. Digestione e terminazione delle cellule: Aggiungere una quantità appropriata di tripsina (≥3 ml) per la digestione per 2-3 minuti, quindi terminare la digestione con terreno di coltura contenente siero.
3. Raccolta delle cellule: Trasferire la sospensione cellulare in una provetta da centrifuga utilizzando una pipetta (evitando la formazione di schiuma) e centrifugare a una velocità appropriata (ad esempio, 800 giri/min) per 5 minuti per consentire alle cellule di depositarsi sul fondo della provetta.
4. Raccolta del precipitato cellulare: Dopo la centrifugazione, scartare delicatamente il surnatante dalla provetta (non scartare il precipitato cellulare). Raccogliere il precipitato cellulare dalla provetta e procedere con l'ulteriore elaborazione necessaria per l'esperimento.